产品货号:
HR8644
中文名称:
细胞膜染色试剂DiI
英文名称:
产品规格:
500μl
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价
细胞膜染色试剂DiI是橙色荧光标记的细胞膜探针,具有549/565nm的最大激发/发射波长。
DiI通过与膜结构的脂质分子结合而标记细胞,具有良好的染料维持性,有着强而稳定的橙红色荧光(Ex/Em=549/565nm),与绿色荧光染料具有良好的荧光分辨性,适合做多重指标染色。工作浓度下,此染料无细胞毒性,不会影响细胞活力以及增殖能力。
以96孔板每孔200μL染色液计,本试剂盒可以染色1000~5000个样本。
检测方法:
● 流式细胞仪● 荧光显微镜● 激光共聚焦
样本类型:
● 悬浮细胞● 贴壁细胞
组份 | 1000-5000T |
细胞膜DiI染料 | 500μL |
说明书 | 1份 |
染料-20℃避光保存;避免反复冻融;有效期6个月。
注:
● 染料长期不用可以-20℃保存。避免反复冻融。短期可以2~8℃保存。
● 染色液为DMSO溶液,冬季气温较低时为凝固状态,极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热融解,变成液体状态后离心至管底部再开盖。
● 可以用手捂住使其融解或37℃短时间水浴。吸头也需要放在培养箱预热,否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。
流式细胞仪或荧光显微镜或激光共聚焦,离心机,PBS或HBSS(无酚红)
● 螺旋盖微量管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体收集至管底,避免开盖时液体洒落。
● 染色液为DMSO溶液,冬季气温较低时在室温时为凝固状态,极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热溶解,吸头也需要放在培养箱预热,否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。
● 使用前,先将本品取出回温至室温,并对其进行简短离心使DMSO溶液集中于管底。
● 细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。
● 标记的条件因细胞种类而异,根据不同样本的实际染色结果做相应调整,在每次实验前,请先根据不同的实验要求、细胞类型、细胞的膜通透性等进行优化,确定最佳条件。
● 以下方法仅供参考,根据需要使用,或者参考文献的使用方法。
● 染色后立即进行分析。
● 本染色液可用于细胞涂片、细胞的检测。
1.染色工作液的配制:
根据样本数量,用HBSS或相应的无血清培养基或其他缓冲液将探针DiI进行500~2500倍稀释,配制成染色工作液。
【注】:
● 开始实验前,使用HBSS缓冲液或无血清培养基稀释染料储存液到需要的工作浓度。工作浓度应根据不同细胞的预实验结果确定的最佳工作浓度,建议至少在超过10倍范围的浓度下进行测试。一般染色终浓度500~2500倍稀释,1000~2000倍适合大多数细胞样本。
● 建议收到产品后,根据单次使用量,对母液进行小量分装,每次使用一管,试剂-20℃避光冻存,一年稳定。
● 工作液现配现用。
● 为了降低探针加载过度可能引起的假阳性,建议在不影响染色效果的情况下尽量使用低浓度。
● 若细胞在染色后于不含染料的培养基中孵育,荧光信号会衰减。
2.细胞染色
悬浮细胞染色
1)用PBS洗涤细胞2次。
【注】:
● 500×g离心5分钟。
2)加入适量体积的染色工作液重悬细胞,使其密度大约为1×106/mL。
3)在37℃孵育细胞5~20分钟,不同的细胞最佳培养时间不同。可以用20分钟作为起始孵育时间,之后优化体系以得到均一的标记结果。
注:
● 若染色不够充分,建议增加染料浓度或延长染色时间。
4)孵育结束,500×g离心5分钟。
5)倾倒上清液,再次缓慢加入37℃预热的培养基重悬细胞。
6)重复(4),(5)步骤两次以上
贴壁细胞染色
1)用PBS洗涤细胞2次。
2)细胞培养板中或细胞爬片上加入适量体积的染色工作液。
注:
● 96孔细胞培养板每孔加入100μL染色液即可。
3) 37℃孵育细胞5~20分钟,不同的细胞最佳培养时间不同。可以用20分钟作为起始孵育时间,之后优化体系以得到均一的标记结果。
注:
● 若染色不够充分,建议增加染料浓度或延长染色时间。
4)吸干染色工作液,用培养液洗培养板或盖玻片2~3次,每次用预热的培养基覆盖所有细胞,孵育5~10分钟,然后吸干培养基。
3.用荧光显微镜或流式细胞仪检测
激发波长为553nm,最大发射波长为570nm。
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